本生PCR板—96孔板鋪板的小技巧

　　96孔板進行鋪板的?當(dāng)細胞用96孔板接種時，細胞經(jīng)常是不均勻分布。第二天就會發(fā)現(xiàn)有些地方出現(xiàn)堆積性生長，而還有不少地方細胞則很稀疏，細胞密集的地方因細胞與細胞之間的接觸抑制影響細胞的生長，這樣就很難評價干預(yù)因素對細胞的作用。因此，將96孔板種均勻也是進行后續(xù)實驗的將以用的老辦法和用的新方法比較一下，以讓大家看看各自優(yōu)缺。

　　1、老方法：植板后，用手拿起96孔板，左右搖動，然后來回搖動幾次，但這種方法通常在2-3個細胞的5口井中分布不均勻。  在大多數(shù)情況下，中間的孔會出現(xiàn)成堆的分布，會讓人感到一陣麻煩。 再一次，看到一位老師將電路板放在振動器上并搖動幾分鐘。 結(jié)果更糟。 細胞都在中間。

　　通常，會在96孔板的每個孔上，加入100微升的細胞懸浮液。把它從左邊加到洞底。加入一半板材后，與未加入的細胞懸浮液混合，然后繼續(xù)加入剩余的一半板材。蓋上蓋子后，用左手輕輕握住木板的左邊，然后用右手輕拍木板的右邊緣。注意力集中在力量上(通常敲擊它三次)。太多或太多次會導(dǎo)致細胞堆積。順時針轉(zhuǎn)動盤子(逆時針方向不好)  ，將剩下的三面逐一拍打，靜置5分鐘左右，然后放入37度的培養(yǎng)箱中。本生熒光定量PCR板

　　2、新方法：這種方法是非常好，非常均勻播種。使用等速吸引吸取細胞，然后吸移嘴對孔(注意尖不接觸孔槍頭底部)的側(cè)壁上，然后再慢慢敲除細胞吸管定植后，不要搖晃板，它只是可以直接在顯微鏡下被放置，這個方法可以被說成是有效的。

　　補充：從6孔板到96孔板，細胞應(yīng)均勻分布分散。用培養(yǎng)基進行稀釋細胞，然后將培養(yǎng)板放置在適當(dāng)?shù)奈恢谩Ｌ砑右粋€細胞時和之后，請勿移動能力培養(yǎng)板;如果在空氣中沒有介質(zhì)吹入，但是不要移動培養(yǎng)板，加入細胞后，靜置20-30分鐘，然后可以將其移入培養(yǎng)箱。這樣，細胞結(jié)構(gòu)通常具有均勻生長。當(dāng)然，提是細胞消化系統(tǒng)良好。

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